Pada tahun 1938, seorang pengumpul seni merayu kepada ahli arkeologi terkemuka Dr. Indiana Jones untuk memulakan pencarian Holy Grail. Indy mengetahui bahawa seorang ahli sejarah zaman pertengahan telah hilang semasa mencarinya, dan lelaki yang hilang itu ialah bapanya sendiri, Dr. Henry Jones Sr.. Dia berhasrat untuk menyelamatkan bapanya dengan mengikuti petunjuk dalam buku nota lelaki tua itu, yang telah dihantar oleh bapanya kepadanya sebelum dia hilang. Indy tiba di Venice, di mana dia meminta bantuan seorang ahli akademik yang cantik, Dr. Elsa Schneider, bersama-sama dengan Marcus Brody dan Sallah. Bersama-sama mereka mesti menghalang Nazi daripada memulihkan kuasa kehidupan abadi dan mengambil alih dunia!