Josie and the Pussycats bestond uit een popmuziekband die uitsluitend uit meisjes bestond en met hun entourage de wereld rondtoerde, waarbij ze verwikkeld raakten in vreemde avonturen, spionagekapsels en mysteries. Op het kleine scherm bestond de groep uit de nuchtere zanger en gitarist Josie, de intelligente tamboerijn speler Valerie en de luchtige blonde drummer Melody. Andere personages waren onder meer hun laffe manager Alexander Cabot III, zijn achterbakse zus Alexandra, haar kat Sebastian en de gespierde roadie Alan.