I fratelli Warner vivono nel serbatoio idrico a torre del lotto della Warner Bros. a Burbank. Nella sigla iniziale del cartone animato viene raccontata la storia dei tre fratelli Warner: essi sarebbero stati ideati negli anni 30', per poi essere rinchiusi nella torre del serbatoio idrico usata come prigione per aver causato scompiglio negli Studios. Gli eventi della serie sono ambientati idealmente nel momento della loro fuga. Tuttavia, i personaggi della serie hanno avventure in vari luoghi e periodi di tempo. I personaggi di Animaniacs interagiscono con personaggi famosi del passato e del presente, nonché con personaggi mitologici della cultura pop e della televisione contemporanee.